Éditeur(s) : HAL CCSD Elsevier Masson
Résumé : National audience
The sources of exposure during diseases due to Aspergillus fungi in cystic fibrosis patients are still poorly explored. We assessed home fungal exposure in patients suffering from cystic fibrosis and analysed its impact on the presence of Aspergillus biological markers, the colonisation of airways, as well as the sensitization and Aspergillus serology. Between March 2012 and August 2012, 34 patients benefited from a visit performed by a home environment medical adviser including sampling for mycological analysis. The number of colonies of Aspergillus was not significantly different in the various sampling sites (P = 0.251), but the number of non-Aspergillus colonies was much higher in the kitchen (P = 0.0045). Subsequently, home fungal exposure was compared between the groups “absence of Aspergillus-related markers” and “presence of Aspergillus-related markers”. Home exposure to Aspergillus (P = 0.453) and non-Aspergillus (P = 0.972) flora was not significant between the 2 groups. Within this series of 34 patients that should be expanded, we note an absence of clear relationship between home exposure and the Aspergillus-linked markers in patients suffering from cystic fibrosis. This result should be taken into account regarding too restrictive hygiene advices provided to families, given the fact that fungal exposure can also results from activities performed away from home.
La source d’exposition au cours des pathologies aspergillaires du patient atteint de mucoviscidose reste encore peu explorée. Nous avons évalué l’exposition fongique domiciliaire chez des patients atteints de mucoviscidose, et analysé son impact sur la présence de marqueurs biologiques aspergillaires, colonisation des voies aériennes, ainsi que sensibilisation et sérologie anti-aspergillaire. Trente-quatre patients ont bénéficié d’une visite par un conseiller médical en environnement intérieur entre mars et août 2012, comprenant des prélèvements à visée mycologique. Le nombre de colonies aspergillaires ne différait pas significativement d’un site de prélèvement à l’autre (p = 0,251), mais le nombre de colonies non aspergillaires était significativement plus important dans la cuisine (p = 0,0045). L’exposition fongique domiciliaire a ensuite été comparée entre les groupes « marqueurs aspergillaires absents » et « marqueurs aspergillaires présents ». L’exposition domiciliaire à une flore aspergillaire (p = 0,453) et non aspergillaire (p = 0,972) ne différait pas significativement entre les 2 groupes. Sur cette série de 34 patients qui mérite d’être élargie, on note une absence de lien évident entre l’exposition domiciliaire et la pathologie aspergillaire. Ce résultat doit rendre prudent sur des conseils d’hygiène parfois très contraignants donnés aux familles, l’exposition fongique étant également importante dans le cadre des activités extra-domiciliaires.
ISSN: 1156-5233

hal-01158660
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DOI : 10.1016/j.mycmed.2015.03.005

Éditeur(s) : HAL CCSD American Society for Microbiology
Résumé : International audience
Anti-Aspergillus IgG antibodies are important biomarkers for the diagnosis of chronic pulmonary aspergillosis (CPA) and allergic bronchopulmonary aspergillosis (ABPA). We compared the performance of a new commercial EIA (Bordier Affinity Products) with those of the Bio-Rad and VirionSerion EIAs. This assay is novel in the association of two recombinant antigens with somatic and metabolic antigens of A. fumigatus. In a prospective multicentre study, 436 serum samples from 147 patients diagnosed with CPA (136 sera/104 patients) or ABPA (94 sera/43 patients) and from 205 controls (206 sera) were tested. We obtained sensitivities of 97%, 91.7%, and 86.1%, and specificities of 90.3%, 91.3%, and 81.5% for the Bordier, Bio-Rad and VirionSerion tests, respectively. The Bordier kit was more sensitive than the Bio-Rad kit (p < 0.01), which was itself more sensitive than the VirionSerion kit (p=0.04). The Bordier and Bio-Rad kits had similar specificities (p=0.8), both higher than that of the VirionSerion kit (p=0.02). The areas under the ROC curves confirmed the superiority of the Bordier kit over the Bio-Rad and the VirionSerion kits (0.977, 0.951 and 0.897, respectively; p < 0.01 for each comparison). In a subset analysis of 279 sera tested with the Bordier and Bio-Rad kits and an in-house immunoprecipitin assay (IPD), the Bordier kit had the highest sensitivity (97.7%), but the IPD tended to be more specific (71.2 and 84.7%, respectively; p=0.10).The use of recombinant, somatic and metabolic antigens in a single EIA improved the balance between sensitivity and specificity, resulting in an assay highly suitable for use in the diagnosis of chronic and allergic aspergillosis.
ISSN: 0095-1137

hal-01282328
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DOI : 10.1128/JCM.03261-15

Éditeur(s) : HAL CCSD Elsevier Masson
Résumé : National audience
La détection d’Aspergillus dans le liquide bronchiolo-alvéolaire (LBA) est un des critères du diagnostic probable ou prouvé de l’aspergillose invasive (AI). Parallèlement à l’examen mycologique (ED et/ou culture) et à la détection de l’antigène galactomannane (GM) identifiés comme critères EORTC/MSG du diagnostic d’AI probable (de Pauw 2008), la PCR sur prélèvements pulmonaires est devenue un argument majeur du diagnostic de routine. Plusieurs méthodes d’amplification ont été publiées et l’objectif de ce travail était d’évaluer les performances de 2 cibles d’amplification : le gène mitochondrial d’A. fumigatus (AFmito) et l’ARN ribosomal 28S. Entre 01/2012 et 10/2015, 324 LBA ont été prospectivement collectés et analysés sur le plan mycologique (ED et culture) et ont bénéficié d’une détermination du GM (EIA Platelia assay Biorad, seuil à 1,0 si mesure isolée dans le LBA, ou 0,8 si associée à une mesure dans le sérum > 0,5) et d’une PCR AFmito. Puis rétrospectivement, un test PCR 28S a été effectué sur les ADN extraits disponibles (312/324). Selon les critères EORTC/MSG modifiés de 2008, les patients testés étaient classés comme suit : 1 AI prouvée, 47 AI probables et 11 AI possibles. Les autres patients étaient considérés comme 11 colonisés, et 256 non infectés. Les sensibilités du GM dans le LBA, de la PCR 28S et de la PCR AFmito étaient de 58 %, 61 % et 50 %, respectivement. La sensibilité de l’examen mycologique (ED ± culture) était de 33 %. La spécificité du GM dans le LBA, des PCR 28S et AFmito PCR et de la culture étaient de 94 %, 97 %, 97 % et 98 %, respectivement. Les valeurs prédictives négatives étaient de 93 %, 95 %, 92 % et 89 %, respectivement. La concordance entre les 2 PCR était de 97 % (cœfficient kappa 0,84), alors qu’elle était de 88 % (kappa 0,40) entre la PCR 28S et le GM dans le LBA, et de 88 % (kappa 0,43) entre la PCR AFmito PCR et le GM dans le LBA. En conclusion, la PCR 28S a présenté la meilleure performance pour la détection moléculaire d’Aspergillus dans le LBA comparativement à la PCR AFmito. La combinaison de la PCR 28S et de la détection du GM dans le LBA permet d’atteindre une sensibilité de 80 % tout en conservant une excellente spécificité (91 %)
ISSN: 1156-5233

hal-01334068
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DOI : 10.1016/j.mycmed.2016.04.048

Éditeur(s) : HAL CCSD
Résumé : National audience
Introduction Une exposition domiciliaire fongique élevée quantifiée par l’index environnemental moléculaire Environmental Relative Moldiness Index (ERMI) est associée au développement de l’asthme dans l’enfance. Dans ce travail, nous avons utilisé cette technique basée sur la quantification moléculaire de 36 champignons dans les poussières pour comparer sa valeur dans l’air à la détection par séquençage haut-débit NGS. Matériels et méthodes Des prélèvements de poussière et d’air ont été collectés dans 20 logements étiquetés « moisis » et 20 logements « non moisis » par les méthodes suivantes : 2 m2 de poussières prélevées à l’aide d’un embout Mitest™ positionné sur un aspirateur ; 3 m3 d’air prélevés par le collecteur cyclonique Coriolis® (Bertin Technologies, France). Tout d’abord, nous avons validé l’ERMI dans l’air versus les poussières, puis comparé dans les prélèvements d’air l’ERMI le séquençage NGS (10 échantillons « moisis » versus 10 échantillons « non moisis »). La cible était le gène 18S séquencé par pyroséquençage à l’aide du système Roche 454. Résultats et discussion Une corrélation entre l’ERMI « poussières » et l’ERMI « air » a été observée avec une valeur significative du test Kendall's tau. Les moisissures intérieures les plus identifiées étaient Aspergillus restrictus, A. fumigatus, A. versicolor, Aureobasidium pullulans Penicillium crustosum, Wallemia sebi, auxquelles s’associaient des moisissures classiquement d’extérieur, Cladosporium cladosporoides, Cladosporium herbarum. L’analyse des séquences obtenues par pyroséquençage était superposable à l’observation par ERMI. Les 3 genres les plus représentés dans l’air intérieur étaient Aspergillus, Penicillium et Cladosporium. Toutefois, quelques genres non inclus dans le panel ont pu être détectés en quantité non négligeable, à l’image des levures notamment du genre Cryptococcus. L’ERMI et le NGS apparaissent donc utiles et corrélés pour la quantification de la charge fongique environnementale dans l’air. L’ERMI a l’avantage d’être une technique rapide, mais sa limite est de cibler a priori 36 genres fongiques (définis initialement aux États-Unis). L’analyse NGS permet d’identifier d’autres genres potentiellement pertinents et donc d’adapter les cibles pour un ERMI « français »
Congrès de la SFMM
Talence-Bordeaux, France

hal-01198651
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DOI : 10.1016/j.mycmed.2015.06.013

Éditeur(s) : HAL CCSD Oxford University Press
Résumé : International audience
Chronic rhinosinusitis (CRS) rank second at chronic inflammatory diseases in industrialized countries and are an important public health concern. Diagnosis relies on a set of arguments including clinical signs, imaging, histopathologic and mycological analyses of sinus specimens, collected during nasal endoscopy. The sensitivity of fungal cultures is reported to be poor, even when direct examination is positive, thus the epidemiology of fungal chronic sinusitis is ill-known. This study evaluated the sensitivity of molecular diagnosis in 70 consecutive samples (61 patients with CRS) analysed at the University Hospital of Rennes during a 3-year period. DNA detection was performed using a conventional PCR method targeting the ITS1/ITS2 sequence and the resulting amplification products were sequenced. Fungal CRS was proven in 42 patients (69%), of which only 20 (48%) had a positive culture. 37/42 (88%) patients were diagnosed with a fungus ball, 3 with allergic fungal CRS and 2 with undetermined fungal CRS. PCR was positive in all 42 cases and direct sequencing allowed to identify fungi in all cases but one, and detected multiple infection in 3. Aspergillus fumigatus was present in 69% of patients; Cladosporium cladosporoides in 9.5%, Scedosporium sp., A. nidulans and A. flavus in 7% each. In 2/19 patients with negative direct examination, sequencing analysis revealed the presence of Capnobotryella sp. and C. cladosporoides, in clinical settings compatible with fungal sinusitis. In conclusion, ITS1/ITS2 PCR had a twice better sensitivity than culture, and combined sequencing provides accurate epidemiological data on fungal CRS.
ISSN: 1369-3786

hal-01383632
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DOI : 10.1093/mmy/myw041