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Vibrio aestuarianus zinc metalloprotease causes lethality in the Pacific oyster Crassostrea gigas and impairs the host cellular immune defenses
Auteur(s) : Labreuche, Yannick Le Roux, Frederique Henry, Joel Zatylny, Celine Huvet, Arnaud Lambert, Christophe Soudant, Philippe Mazel, Didier

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Aspects moléculaires et biochimiques des stylicines, peptides multifonctionnels identifiés chez la crevette bleue du Pacifique Litopenaeus stylirostris (Crustacea, Decapoda)
Auteur(s) : Rolland, Jean-luc

Éditeur(s) : Université Montpellier 2 - Sciences et Techniques du Languedoc
Résumé : The work reported here was motivated by the economical importance of the pacific blue shrimp Litopenaeus stylirostris farming where high mortality rates are due to bacterial and viral diseases. It consists in the characterisation of two original peptides, the first members of a new multifunctional family of peptides from peneide shrimps, the stylicines. Those two peptides, named stylicines 1 and 2, are negatively charged (pI < 6.0), and characterised by a proline-rich N-terminal region and a C-terminal region containing 13 cysteine residues. Stylicines are synthesized by heamocytes where they are stored within small cytoplasmic granules. To understand the role of these peptides in the immune response of shrimps to a vibrio infection, their recombinant forms were produced in E. coli BL21 (DE3) plysS, purified and characterised. The two rstylicines display biological anti-proliferative and blood clotting activities. Only rstylicine 1 displays antimicrobial activities: antifungal against Fusarium oxysporum (MIC<2.5μM) and bacteriostatic against Gram (−) bacteria, Vibrio sp. (MIC<80μM). Moreover this peptide displays an LPS-binding activity (dissociation constant (Kd) of 9.6×10−8 M) and agglutinate Vibrio. penaeicida "in vitro". Finally, the presence of sequences coding for modified forms of stylicine 1 in some shrimp’s genome may be in relation with their lower ability to survive infections.
Les travaux présentés dans ce mémoire ont été motivés par l’importance économique de l’élevage de la crevette bleue du pacifique Litopenaeus stylirostris dont les fortes mortalités sont principalement dues au développement de maladies bactériennes et virales. Ils ont consisté en la caractérisation des deux premiers membres d’une famille originale de peptides multifonctionnels présents chez les crevettes pénéides, les stylicines. Ces peptides, nommés stylicines 1 et 2, sont des peptides anioniques (pI < 6.0), formés d’une région amino-terminale riche en résidus de type proline et d’une région carboxyterminale riche de treize résidus cystéines. Ces molécules sont synthétisées et stockées dans de petits granules présents dans le cytoplasme des hémocytes. Pour mieux appréhender leurs rôles dans la réponse immunitaire des crevettes à une infection par des Vibrio, leurs formes recombinantes ont été produites dans E. coli BL21 (DE3) plysS, purifiées et caractérisées. Les deux rstylicines présentent des activités antiproliférative et anticoagulante. Seule la rstylicine1 présente des activités antimicrobiennes : antifongique sur Fusarium oxysporum (CMI<2.5 μM), et antibactérienne (bactériostatique) sur Vibrio sp (CMI<80 μM). Ce peptide est également capable de se lier aux LPS des bactéries à Gram (-) (Kd= 9.6x10-8 M) et d’agglutiner V. penaeicida "in vitro". Enfin, l’existence de gènes codant des formes modifiées de la stylicine1, chez certaines crevettes, pourrait être en relation avec une diminution de la résistante des individus aux infections.

Droits : 2010 The Author, Univ Montpellier 2
http://archimer.ifremer.fr/doc/00024/13558/10612.pdf
http://archimer.ifremer.fr/doc/00024/13558/

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Étude des interactions entre infection à ostreid herpesvirus 1, immunité, autophagie et pesticides chez l’Huître creuse, Crassostrea gigas
Auteur(s) : Moreau, Pierrick

Éditeur(s) : Université de La Rochelle, Ecole doctorale Gay Lussac
Résumé : The thesis work is part of the very current issue on mass mortality outbreaks affecting Pacific oyster, C. gigas, spat and juveniles and questions about the involvement of pesticides in this phenomenon. The first part of this thesis was devoted to study the effects of pesticides on hemocyte parameters in the Pacific oyster (in vitro and in vivo). The immunomodulator effect of selected pesticides (alone or in mixture) has been explored principally through flow cytometry. The second part concerned the study of the effects of a pesticides mixture on OsHV-1 itself. No direct effects have been reported on the viral particles in presence of the pollutants. Moreover, pesticide effects on Pacific oysters were also explored through experimental pathology assays after treatment of animals with a polluant mixture. Results showed that pesticide treated oysters appeared more susceptible to the viral infection in experimental conditions. The third part concerned the study of autophagy in the Pacific oyster, C. gigas. The publication of the complete genome in 2012 has opened up new possibilities for the study of innate immunity in this species. The study of autophagy for the first time in oysters consisted in a first step in the in silico search for genes involved in this pathway and the corresponding proteins by Western blotting. Then, the role of this important process in innate immunity has been explored through reproduction infections tests with or without modulators of autophagy. Results showed that autophagy appeared as involved in defence mechanisms against viral and bacterial infection in Pacific oysters.
Le travail de thèse s’inscrit dans la problématique très actuelle des mortalités massives de naissain et de juvéniles d’huîtres creuses, C. gigas, et des questionnements autour de l’implication des pesticides dans ce phénomène. La première partie de la thèse a été consacrée à l’étude des effets de pesticides sur les capacités hémocytaires de l’huître creuse (in vitro et in vivo). L’effet immunomodulateur des xénobiotiques sélectionnés (seul ou en mélange) a été exploré principalement au travers de la cytométrie en flux. La deuxième partie de la thèse a concerné l’étude des effets d’un mélange de pesticides sélectionnés sur le virus OsHV-1 et l’infection qu’il induit chez l’huître creuse. Les effets des pesticides sur le virus lui-même ont été évalués. Les expériences réalisées non pas permis de mettre en évidence dans les conditions testées, de dégradation des particules virales en présence des polluants. D’autre part, leurs effets sur les huîtres elles-mêmes ont été explorés après traitement des animaux avec un mélange de pesticides lors d’essais de pathologie expérimentale. Il a ainsi pu être montré que des huîtres préalablement comtaminées par un mélange de pesticides à des concentrations retrouvées dans l’environnement semblaient être plus sensibles à l’infection virale. La troisième partie de la thèse a concerné l’étude de l’autophagie chez l’huître creuse, C. gigas. La publication du génome complet de cette espèce en 2012 a ouvert de nouvelles possibilités pour étudier l'immunité innée. L’étude de l’autophagie réalisée pour la première fois chez l’huître creuse a consisté lors d’une première étape en la recherche in silico de gènes impliqués dans cette voie et des protéines correspondantes par western blotting. Puis, le rôle de ce processus important dans l’immunité innée a été exploré au travers d’essais de reproduction d’infections en présence ou non de modulateurs de l’autophagie. Les résultats obtenus semblent montrer que l’autophagie soit un processus important pouvant être impliqué dans les capacités de défense de l’huître creuse vis-à-vis d’infections virales et bactériennes.

Droits : 2014 Université de La Rochelle
http://archimer.ifremer.fr/doc/00226/33740/32149.pdf
http://archimer.ifremer.fr/doc/00226/33740/

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Expression, tissue localization and synergy of antimicrobial peptides and proteins in the immune response of the oyster Crassostrea gigas
Auteur(s) : Schmitt, Paulina De Lorgeril, Julien Gueguen, Yannick Destoumieux-garzon, Delphine Bachere, Evelyne

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A relationship between antimicrobial peptide gene expression and capacity of a selected shrimp line to survive a Vibrio infection
Auteur(s) : De Lorgeril, Julien Gueguen, Yannick Goarant, Cyrille Goyard, Emmanuel Mugnier, Chantal Fievet, Julie Piquemal, D Bachere, Evelyne

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