Éditeur(s) : HAL CCSD Publisher : Paris : Baillière [1980-. Latest Publisher : Paris : Elsevier
Résumé : National audience
Introduction Les monocytes sont constitués de populations cellulaires hétérogènes aux propriétés distinctes. Il est retrouvé une sur-représentation de la population monocytaire CD14+/CD16+ pro-inflammatoire au cours de certaines connectivites. Cette population monocytaire s’oppose aux monocytes CD14+/CD16– qui jouent un moindre rôle dans l’amplification de la réponse inflammatoire. Les monocytes et les macrophages pourraient jouer un rôle central dans les mécanismes de fibrose au cours de la sclérodermie systémique. L’association entre les manifestations cliniques de la sclérodermie systémique et les différentes populations monocytaires reste à préciser. L’objectif de cette étude « proof of concept »est d’évaluer l’association entre la population monocytaire CD14+/CD16+ et les manifestations cliniques de fibrose chez les patients sclérodermiques. Patients et méthodes Cinquante-cinq patients répondant aux critères ACR 2013 de sclérodermie systémique ont été inclus de manière consécutive de mars à juillet 2015. Les atteintes fibrosantes ont été évaluées simultanément selon les données du bilan viscéral annuel en centre de compétence : l’atteinte cutanée était évaluée cliniquement selon le score de Rodnan modifié, les patients étaient classés selon la classification de Leroy (atteinte cutanée diffuse, atteinte cutanée limitée, sine scleroderma). La présence d’une pneumopathie interstitielle diffuse était évaluée par TDM thoracique, son retentissement sur la fonction respiratoire était précisé par les épreuves fonctionnelles respiratoires (capacité pulmonaire totale, capacité vitale forcée, DLCO). La NFS réalisée le jour du bilan viscéral était traitée en hématoflow permettant de préciser les sous populations monocytaires en fonction de leur statut CD16+ ou CD16–. Les données cliniques étaient relevées en aveugle vis-à-vis des données de cytométrie en flux. Résultats 55 patients sclérodermiques ont été inclus. Le taux moyen de monocytes CD16+ était de 0,054 G/L (SD = 0,029). Les patients avec une atteinte cutanée diffuse avaient des taux significativement plus élevés de monocytes CD16+ (p = 0,021), alors que les taux de monocytes CD16–ne différaient pas entre les patients avec atteinte cutanée diffuse et cutanée limitée. Le score de Rodnan modifié était corrélé de manière significative avec le taux de monocytes CD16+ (R = 0,513, p < 0,001). Il existait une tendance à l’association entre des taux élevés de CD16+ et la présence d’une pneumopathie interstitielle diffuse détectée par TDM (p = 0,113). Il existait une corrélation négative significative (p < 0,05) entre les taux de CD16+ et les résultats des épreuves fonctionnelles respiratoires (capacité pulmonaire totale et DLCO), attestant d’une fonction respiratoire moins bonne chez les patients à taux plus élevés de monocytes CD16+. Il n’était pas retrouvé d’association entre les taux de CD16+ et les autres paramètres cliniques ou immunologiques. Discussion Cette étude « proof of concept » semble montrer une association entre des taux élevés de monocytes CD16+ et certains paramètres de gravité des atteintes fibrosantes de la maladie. En plus de leur association à la gravité des atteintes fibrosantes de la sclérodermie systémique, les taux de monocytes CD16+ pourraient également avoir un intérêt pronostique qui reste à évaluer. Des travaux in vitro ont montré que l’ajout de TGFb au milieu de culture cellulaire de monocytes induisait une augmentation de l’expression du CD16+ par ces monocytes. Les monocytes CD16+ sont également une source de production d’IL-1 bêta et de TNF alpha pro-inflammatoires. D’autres travaux in vitro ont très récemment démontré la plus grande capacité des monocytes CD16+ à se différencier préférentiellement en macrophages ayant également des propriétés pro-inflammatoires. La sous-population monocytaire CD16+ peut également être hiérarchisée en fonction de l’intensité d’expression du CD16. La place précise de ces différentes populations monocytaires dans la physiopathologie de la sclérodermie systémique reste encore à déterminer. Les liens ténus entre monocytes et macrophages, dont l’implication est maintenant reconnue au cours de la sclérodermie invitent à investiguer davantage le rôle possible du monocyte dans le cadre de cette maladie inflammatoire et fibrosante afin d’identifier d’éventuelles nouvelles cibles thérapeutiques ou marqueurs pronostiques. Conclusion Dans cette étude « proof of concept », sur un nombre restreint de patients atteints de sclérodermie systémique répondants aux critères ACR 2013, le taux de monocytes CD16+ semble corrélé avec les atteintes fibrosantes de la maladie, laissant supposer une implication possible de cette sous-population monocytaire dans la physiopathologie de cette connectivite
ISSN: 0248-8663

hal-01321851
https://hal-univ-rennes1.archives-ouvertes.fr/hal-01321851
DOI : 10.1016/j.revmed.2016.04.253

Résumé : in mollusc hatcheries. Consequently, we assessed themost commonly used species to establish their growth and size profiles, their cytomorphological, biochemical, biomolecular identification as well as their cytometer signs, and also their ability to grow under extreme conditions of temperature and salinity. This work aimed at matching the conformity of the strains used in Argenton (dispatched to most of the French commercial hatcheries) to those of a referenced culture collection. A previous screening preceded this study, because of the 45 species and/or clones held originally, Argenton kept no more than 15 species. As most of the latter are also represented in referenced collection, our strains are therefore correctly identified. On the other hand, the combination of several approaches (characteristic of growth and size, cytomorphological description, establishment of biochemical and biomolecular profiles) to discriminate the different species was broadly successful. Nevertheless, flow cytometer measurements were extremely variable from sample to sample, dueto their high sensitivity to the microalga's physiological state. Accordingly, we have developed a method of identification which could be transferred at a national or international level, to the Institutions in charge of microalgae collections. Furthermore, we achieved relevant data to establish an identity card for each of the microalgae suitable for mollusc hatcheries.
La caractérisation des microalgues fourrage constituait l'un des points perfectibles au regard de ce qui est appliquée en microbiologie. Nous avons alors cherché à définir, pour les espèces les plus utilisées en écloserie, leurs profils de croissance et de taille, leur caractéristiques cytomorphologique, cytofluorimétrique, biochimique et biomoléculaire, et enfin, précisé leur aptitude au développement sous des conditions extrêmes de température et de salinité (écotolérance). Ce travail avait pour but de vérifier, d'une part, la conformité des souches utilisées à l'écloserie d'Argenton (auprès de laquelle se fournissent la plupart des écloseries commerciales françaises) en comparant les espèces utilisées à celles issues d'une collection référencée. Un premier balayage avait été réalisé avant la mise en place de cette étude puisque sur les 45 espèces et clones détenus originellement, Argenton ne possédait plus que 15 espèces. La plupart de ces dernières ayant leur équivalent en collection référencée notre souchier est désormais parfaitement identifiée. D'autre part, la confrontation de plusieurs approches, caractéristique de la croissance et de taille, description cytomorphologique, établissement des profils biochimique et biomoléculaire, écotolérance, signature cytofluorimétrique, pour discriminer les différentes espèces de microalgues fourrage a été globalement couronnée de succès. Seule cette dernière technique n'a pas permis de caractériser les espèces entre elles, les paramètres mesurés en cytométrie de flux étant particulièrement sensibles à l'état physiologique des microalgues, très variable d'un échantillon à un autre. Nous disposons dorénavant d'une méthode d'identification qu'il serait souhaitable de transférer, au niveau national voire international, auprès des organismes en charge des collections. De plus, nous disposons dorénavant de données pertinentes pour établir pour chacune des microalgues d'intérêt aquacole une véritable carte d'identité.

Droits : info:eu-repo/semantics/openAccess
http://archimer.ifremer.fr/doc/2004/rapport-1546.pdf
http://archimer.ifremer.fr/doc/00000/1546/

Éditeur(s) : Université de Montpellier II
Résumé : The sea bass, Dicentrarchus labrax, has been subjected to intensive aquaculture on the Mediterranean cost for ten years. Marine fish hatcheries are key factors in the aquaculture field, and face different pathologies, especially one of viral origin (nodavirus) that could challenge their feasibility. Consequently, we have tried to provide some data on larvae and spawning stocks. Firstly, we have studied the immunoglobulins, components of the specific humoral immunity, and their role as antibodies. On adult basses, these immunoglobulins are tetrameric molecules with high molecular weight (850 kD), made of heavy (H) - 80 kD and light (L) - 26 kD chains. In the eggs, simplest forms such as monomeric or dimeric are brought to the fore; they are located under the chorionic membrane. Secondly, we have studied the development of the immunity system on larvae, preparing IgM assays with ELISA method, the study on the organogenesis of the main lymphoid organs, and using flow cytometry for the ontogenesis of IgM producing cell. Based on this experience, we can propose a date for the immunocompetence onset of the bar, i.e. from the 54th day of the hatchery phase. Finally, we made the most of these different results to study a viral pathology (nodavirus) in spawners and larvae. We defined an experimental contamination model for larvae and eggs, and we highlighted that eggs born from vaccinated hen fishes were protected against the nodavirus.
Le bar, Dicentrarchus labrax, fait l'objet d'une aquaculture intensive sur le littoral Méditerranéen depuis une dizaine d'années. Les écloseries marines représentent un des maillons clefs de cette filière aquacole, et sont confrontées à différentes pathologies, dont une d'origine virale (nodavirus), pouvant remettre en cause leur faisabilité. Aussi, nous avons tenté d'apporter quelques données concernant la protection des larves et des géniteurs reproducteurs. Dans un premier temps, nous avons étudié les immunoglobulines, éléments de l'immunité spécifique humorale ainsi que leur rôle anticorps. Chez les bars adultes ces immunoglobulines sont des molécules tétramériques de haut poids moléculaire (850 kD), composées de chaînes lourdes (H) de 80 kD et légères (L) de 26 kD. Dans les oeufs, des formes plus simples, monomériques ou dimériques, sont mises en évidence et sont localisées sous la membrane chorionique. Dans un second temps, nous avons étudié la mise en place du système immunitaire spécifique chez les larves, en effectuant le dosage des IgM par ELISA, l'étude de l'organogenèse des principaux organes lymphoïdes, puis celle de l'ontogenèse des cellules productrices d'IgM par cytométrie de flux. L'ensemble de cette étude nous permet de proposer une date d'acquisition de l'immunocompétence à partir du 54ème jour d'élevage chez le bar. Enfin, ces différents résultats ont été mis à profit dans le cadre d'une pathologie virale (nodavirus) touchant les reproducteurs et les larves. Après avoir défini un modèle de contamination expérimental des larves et des oeufs, nous avons mis en évidence une protection des oeufs lorsque ceux-ci proviennent d'une femelle vaccinée (vaccin expérimental) contre le nodavirus.

Droits : info:eu-repo/semantics/openAccess
http://archimer.ifremer.fr/doc/1997/these-1265.pdf
http://archimer.ifremer.fr/doc/00000/1265/

Éditeur(s) : Université de La Rochelle, Ecole doctorale Gay Lussac
Résumé : The thesis work is part of the very current issue on mass mortality outbreaks affecting Pacific oyster, C. gigas, spat and juveniles and questions about the involvement of pesticides in this phenomenon. The first part of this thesis was devoted to study the effects of pesticides on hemocyte parameters in the Pacific oyster (in vitro and in vivo). The immunomodulator effect of selected pesticides (alone or in mixture) has been explored principally through flow cytometry. The second part concerned the study of the effects of a pesticides mixture on OsHV-1 itself. No direct effects have been reported on the viral particles in presence of the pollutants. Moreover, pesticide effects on Pacific oysters were also explored through experimental pathology assays after treatment of animals with a polluant mixture. Results showed that pesticide treated oysters appeared more susceptible to the viral infection in experimental conditions. The third part concerned the study of autophagy in the Pacific oyster, C. gigas. The publication of the complete genome in 2012 has opened up new possibilities for the study of innate immunity in this species. The study of autophagy for the first time in oysters consisted in a first step in the in silico search for genes involved in this pathway and the corresponding proteins by Western blotting. Then, the role of this important process in innate immunity has been explored through reproduction infections tests with or without modulators of autophagy. Results showed that autophagy appeared as involved in defence mechanisms against viral and bacterial infection in Pacific oysters.
Le travail de thèse s’inscrit dans la problématique très actuelle des mortalités massives de naissain et de juvéniles d’huîtres creuses, C. gigas, et des questionnements autour de l’implication des pesticides dans ce phénomène. La première partie de la thèse a été consacrée à l’étude des effets de pesticides sur les capacités hémocytaires de l’huître creuse (in vitro et in vivo). L’effet immunomodulateur des xénobiotiques sélectionnés (seul ou en mélange) a été exploré principalement au travers de la cytométrie en flux. La deuxième partie de la thèse a concerné l’étude des effets d’un mélange de pesticides sélectionnés sur le virus OsHV-1 et l’infection qu’il induit chez l’huître creuse. Les effets des pesticides sur le virus lui-même ont été évalués. Les expériences réalisées non pas permis de mettre en évidence dans les conditions testées, de dégradation des particules virales en présence des polluants. D’autre part, leurs effets sur les huîtres elles-mêmes ont été explorés après traitement des animaux avec un mélange de pesticides lors d’essais de pathologie expérimentale. Il a ainsi pu être montré que des huîtres préalablement comtaminées par un mélange de pesticides à des concentrations retrouvées dans l’environnement semblaient être plus sensibles à l’infection virale. La troisième partie de la thèse a concerné l’étude de l’autophagie chez l’huître creuse, C. gigas. La publication du génome complet de cette espèce en 2012 a ouvert de nouvelles possibilités pour étudier l'immunité innée. L’étude de l’autophagie réalisée pour la première fois chez l’huître creuse a consisté lors d’une première étape en la recherche in silico de gènes impliqués dans cette voie et des protéines correspondantes par western blotting. Puis, le rôle de ce processus important dans l’immunité innée a été exploré au travers d’essais de reproduction d’infections en présence ou non de modulateurs de l’autophagie. Les résultats obtenus semblent montrer que l’autophagie soit un processus important pouvant être impliqué dans les capacités de défense de l’huître creuse vis-à-vis d’infections virales et bactériennes.

Droits : 2014 Université de La Rochelle
http://archimer.ifremer.fr/doc/00226/33740/32149.pdf
http://archimer.ifremer.fr/doc/00226/33740/

Résumé : La zone latérale des filaments branchiaux des bivalves Codakia orbiculata et Lucina pensylvanica est le lieu d'une symbiose chimioautotrophe avec des bactéries sulfo-oxydantes hébergées dans des cellules spécialisées, appelées bactériocytes. Dans cette étude, nous nous sommes proposés de déterminer les mécanismes qui sous-tendent la plasticité cellulaire et tissulaire observée au cours des processus de décolonisation et de recolonisation bactérienne. Pour ce faire, des individus collectés dans leur milieu naturel, ont été maintenus au laboratoire dans des bacs d'eau de mer filtrée en absence de nourriture et de soufre réduit, afin de provoquer la décolonisation bactérienne des filaments branchiaux. Lorsque la branchie apparaissait purgée de ses symbiotes, les individus ont été remis dans leur habitat naturel afin de provoquer sa recolonisation. L'analyse des branchies au cours de ces processus a fait appel à des techniques variées (histologie, immunohistochimie, hybridation in situ, cytométrie en flux, dosage des protéines et spectrométrie de fluorescence X). Les résultats obtenus ont permis de montrer que l'acquisition environnementale mise en évidence chez les juvéniles des Codakia se poursuivait tout au long de la vie des adultes. Cette étude a également permis une meilleure compréhension des mécanismes tissulaires sous-jacents à la plasticité du filament branchial en mettant en évidence les processus d'apoptose et de prolifération cellulaire qui ont lieu au cours des processus de décolonisation et de recolonisation. Ces processus s'accompagnent d'une variation de la teneur en soufre élémentaire, ainsi que de la taille relative et du contenu génomique des symbiotes
The lateral zone of gills filaments of coastal bivalves Codakia orbiculata and Lucina pensylvanica is the site of chemoautotrophic symbiosis with sulfur-oxidizing bacteria, housed in specialized cells called bacteriocytes. The objective of this thesis is to determine the mechanisms underlying cel1 plasticity and tissue plasticity observed in the lateral zone of gills filaments during the processes of bacterial decolonization and recolonization. In order to do this, the individuals collected in their natural habitat were maintained at the laboratory in seawater filtered tanks, without food and reduced sulfur, to cause bacterial decolonization. When the gills seemed to be purged, the individuals were returned to their natural habitat in order to cause the bacterial recolonization of gills filaments. The analysis of the gills during these processes involves several techniques (histology, immunohistochemistry, molecular hybridization, flow cytometry, total protein assays, protein sulfur assays, X-ray fluorescence spectrometry).This study shows that symbiont acquisition can occur during the entire life of Codakia bivalves. It also allows a better understanding of gills filaments plasticity by highlighting apoptosis and cell proliferation during decolonization and recolonization processes.Theses processes are accompanied with of elemental sufur, relative size and genomic content of symbiontes.

http://www.theses.fr/2011AGUY0461/document

Résumé : Nous avons étudié les phénomènes de polyploïdisation chez l'igname Dioscorea alata qui comprend trois cytotypes diploïde (2n=40), triploïde (2n=60) et tétraploïde (2n=80) en vue d'optimiser les stratégies de production d'hybrides polyploïdes. Chez ce complexe polyploïde l'augmentation de la ploïdie est corrélée avec une augmentation de la vigueur et des rendements plus élevés et plus stables. Dans un premier temps nous avons démontré l'autotétraploïdie des variétés tétraploïdes à l'aide de trois approches différentes: des analyses d'hérédité de marqueurs microsatellites, l'observation de phénomènes de double réduction et l'étude des méioses des cellules mères de pollen. Nous avons ensuite déterminé quels sont les mécanismes les plus probables à l'origine des polyploïdes naturels via l'étude de la transmission de l'hétérozygotie parentale à l'aide de microsatellites et par l'étude des incompatibilités au niveau de l'albumen lors de différents croisements intracytotypes et intercytotypes en utilisant la cytométrie en flux. Les résultats obtenus montrent que les polyploïdes de D. alata seraient apparus via la formation de gamètes non réduits de clones diploïdes. Le pool triploïde se serait édifié et diversifié uniquement par voie femelle, du fait de la non viabilité des croisements intercytotypes et de la stérilité des femelles et mâles triploïdes. Le pool tétraploïde serait apparu par union de deux gamètes non réduits de clones diploïdes (polyploidisation sexuelle bilatérale). Par la suite ce pool aurait été diversifié via des croisements intercy
We studied polyploidisation phenomena in the yam Dioscorea alata that includes three cytotypes -diploid (2n=40), triploid (2n=60) and tetraploid (2n=80) -in order to optimise polyploid hybrid production strategies. In this complex polyploid, the increase in ploidy is correlated with an increase in vigour and higher and more stable yields. We first showed the autotetraploidy of tetraploid varieties using three different approaches: heredity analyses of microsatellite markers, the observation of double reduction phenomena, and the study of meiosis of pollen mother cells. We then determined the mechanisms most likely to be at the origin of natural polyploids through the study of the transmission of parental heterozygoty using microsatellites and the study of incompatibilities at the endosperm level at the time of different intracytotypic and intercytotypic crosses using flow cytometry. The results obtained reveal that the polyploids of D. alata probably appeared through the formation of non-reduced gametes of diploid clones. The triploid pool would then have been constituted and diversified through the female pathway as a result of the non-viability of intercytotypic crosses and the sterility of female and male triploids. The tetraploid pool would have appeared as a result of the union of two non-reduced gametes of diploid clones (bilateral sexual polyploidisation). This pool would then have diversified through intercytotypic crosses with the formation of 2n gamètes through both the female and the male pathway, as well as by intracytotypic crosses within the 4X pool.

http://www.theses.fr/2012AGUY0519/document