Real-time PCR assay for rapid detection and quantification of Vibrio aestuarianus in oyster and seawater: A useful tool for epidemiologic studies Auteur(s) : Saulnier, Denis De Decker, Sophie Haffner, Philippe Éditeur(s) : Elsevier Résumé : Because Vibrio aestuarianus is known to cause serious infections in Pacific oyster Crassostrea gigas, a real-time PCR assay was developed targeting the dnaJ gene of this bacterium. Only V. aestuarianus strains isolated from C. gigas mortality events in different geographic areas and the reference strain tested positive, whereas no amplification products was obtained with type strains belonging to 23 other species of Vibrio. Sensitivity and reproducibility of the method were assessed using either seawater or oyster homogenate samples spiked with one V aestuarianus strain. All these samples were stored at -20 degrees C in order to mimic retrospective or grouped natural sample analysis without quantification bias due to prolonged freezing. Analysis of standard curves revealed excellent correlation values between light microscopy cell enumerations and PCR Threshold Cycle (Ct) values, and acceptable PCR reaction efficiencies for all type of samples. Quantification curves of both sample types were equivalent, with a detection level as low as 1.6 V. aestuarianus cells in the PCR reaction tube, corresponding to 1.6.10(2) cells ml(-1) and 1.6.10(2) cells mg(-1) in seawater and entire oyster samples, respectively, taking into account the dilution factor used for appropriate template DNA preparation. Comparison of PCR assay reproducibility according to the complexity of samples revealed that seawater samples gave more reproducible quantification measures than samples from oyster homogenate, with precision of measured Ct values inferior to 0.4 and 0.6 respectively at 99% confidence. Use of the real-time PCR assay allowed us to monitor V. aestuarianus load in oysters naturally infected with this pathogen. Furthermore, we were able to detect V aestuarianus in samples of seawater in which oysters had been reared and in algal cultures used for feeding oysters. Because of the rapidity and reliability of the real-time PCR assay method used in this study, just a few hours are needed compared with the two days required using the classic culture method, this technique will be particularly valuable in mollusc pathology laboratories, for monitoring the source and course of infections by V. aestuarianus in pathogenesis and epidemiologic studies, as well as for designing appropriate prophylactic control measures. (C) 2009 Elsevier B.V. All rights reserved. Journal of Microbiological Methods (0167-7012) (Elsevier), 2009-05 , Vol. 77 , N. 2 , P. 191-197 Droits : 2009 Elsevier B.V. All rights reserved. http://archimer.ifremer.fr/doc/2009/publication-6447.pdf DOI:10.1016/j.mimet.2009.01.021 http://archimer.ifremer.fr/doc/00000/6447/ | Partager |
Mission du 13-05 au 07-06-90 à l'écloserie Sodacal - Utilisation des AQUA-PLAKr en écloserie industrielle. Rapport final Auteur(s) : Haffner, Philippe Résumé : La mission effectuée du 13 mai au 7 juin 90 à l'écloserie de la ferme Sodacal en Nouvelle-Calédonie avait pour but de tester les aqua-plakR pour les comptages bactériens en routine dans une écloserie industrielle. La technique classique (comptage sur boite de Pétri) est en effet très peu utilisée par les éleveurs du fait de sa lourdeur alors qu'une bonne connaissance de l'évolution de la flore bactérienne dans les bacs d'élevages peut s'avérer nécessaire pour assurer une gestion sanitaire correcte de ces élevages. D'autre part, une collection la plus large possible des différentes souches bactériennes rencontrées a été réalisée. Le présent rapport n'aborde que l'aspect utilisation des aqua-plakR, les souches bactériennes étant actuellement en cours d'identification. Un rapport final abordera plus l'aspect qualitatif de la flore bactérienne rencontrée et son éventuel répercution sur les élevages larvaires. Droits : 1990 Ifremer http://archimer.ifremer.fr/doc/00131/24191/22185.pdf http://archimer.ifremer.fr/doc/00131/24191/ | Partager |
Contrat de Plan Etat Région Poitou-Charentes 1994-1998. Convention 95 RPC R 62 - Programme Pathologie - Rapport Scientifique année 1995 Auteur(s) : Renault, Tristan Berthe, Franck Chollet, Bruno Cochennec, Nathalie Haffner, Philippe Le Deuff, Rose-marie Thuillier, Benoit Résumé : Le but de ce programme pathologie est de rechercher et d'étudier les agents pathogènes connus et inconnus chez les mollusques bivalves marins, plus particulièrement chez l'huître creuse, Crassostrea gigas, afin d'identifier d'éventuels agents causant des mortalités, de proposer des mesures prophylactiques et de définir des conditions zootechniques permettant aux professionnels de limiter l'impact des maladies sur leur cheptel. La présence de maladies, chez les mollusques bivalves marins dont l'impact socio économique peut être catastrophique pour les productions conchylicoles, et l'accroissement des échanges de produits d'aquaculture entre les pays de la CEE et avec les pays tiers nécessitent le renforcement des recherches dans les domaines de la pathologie. En particulier, du fait du mono élevage de l'huître japonaise, Crassostrea gigas, en France, il semble aujourd'hui indispensable d'effectuer des contrôles zoosanitaires réguliers chez cette espèce. Ces travaux ont d'autant plus d'importance qu'aujourd'hui, devant les pathologies rencontrées, les professionnels restent extrêmement démunis (traitements inapplicables ou inexistants). Dans ce cadre, la promptitude du diagnostic ainsi que l'acquisition de données épidémiologiques et biologiques concernant les agents pathogènes impliqués sont les meilleurs moyens d'éviter leur dissémination chez les mollusques bivalves marins. Les travaux entrepris dans ce cadre par l'URPIG, semblent d'autant plus indispensables qu'il n'existait pas jusqu'à ces dernières années de pathologies identifiées chez l'huître creuse, Crassostrea gigas, sur le littoral français. Cependant depuis 1991, sont apparus dans certaines écloseries françaises des épisodes de mortalité sur des larves de cette espèce. Il a été possible de détecter un virus apparenté à la famille des Herpesviridae par ses caractères morphologiques (NICOLAS et al., 1992) et de démontrer sa pathogénicité pour les larves (LE DEUFF et al., 1994). Par ailleurs, en 1993, 1994 et 1995, un virus de même type, a été observé en association à de fortes mortalités sur différents lots de naissain de la même espèce, originaires d'écloseries et de captage naturel. Par ailleurs, en 1993, suite à l'observation d'anomalies au niveau des branchies chez des huîtres creuses provenant de Charente Maritime et du bassin d'Arcachon associées à de médiocres performances de croissance, il a été entrepris des analyses de divers échantillons, en histologie classique et en microscopie électronique à transmission. Ces examens ont permis de révéler la présence au niveau des branchies, chez un nombre non négligeable d'animaux, d'un microorganisme de type chlamydien (RENAULT and COCHENNEC, 1995). Il a également été possible, chez cette même espèce, de détecter la présence d'un organisme de type rickettsien au niveau des branchies (RENAULT, COCHENNEC and CHOLLET, 1995). Droits : 1995 Ifremer http://archimer.ifremer.fr/doc/00043/15453/12828.pdf http://archimer.ifremer.fr/doc/00043/15453/ | Partager |
Suivi bactérien d'un élevage larvaire de crevettes péneïdes - Ecloserie CAMCAR, 12 janvier - 12 février 1991 Auteur(s) : Haffner, Philippe Berthe, Franck Résumé : La mission effectuée de mi-janvier à mi-février à l'écloserie CAMCAR (Colombie), avait pour objectif l'analyse quantitative et qualitative de la flore bactérienne présente en élevage larvaire de crevettes pénéides. L'intérêt principal du choix de ce site est de travailler dans une écloserie jeune (- de de deux ans) et n'ayant jamais rencontré de problème pathologique. Cette analyse fait donc le point sur les équilibres bactériens présents dans une écloserie industrielle saine mais bien évidemment dans un lieu et à une époque précise. Droits : 1991 Ifremer http://archimer.ifremer.fr/doc/00131/24192/22186.pdf http://archimer.ifremer.fr/doc/00131/24192/ | Partager |
Histological abnormalities related to mortality in penaeid shrimp (Penaeus stylirostris) reared in New-Caledonia Auteur(s) : Berthe, Franck Legroumellec, Marc Haffner, Philippe Renault, Tristan Éditeur(s) : European Association of Fish Pathologists Seventh International Conference Diseases of Fish and Shellfish Résumé : Outbreaks of mass mortality occurred since 1993 in penaeid shrimp (Penaeus stylirostris) reared in New-Caledonia. Since then, the disease, called "syndrome 93" (S93) has inflicted serious losses (60 to 100%) during the cold period and thus must be considered as an economically significant disease. Droits : info:eu-repo/semantics/openAccess http://archimer.ifremer.fr/doc/1995/acte-2974.pdf http://archimer.ifremer.fr/doc/00000/2974/ | Partager |
Contrat de Plan Etat Région Poitou-Charentes 1994-1998. Convention 96 RPC R70 - Programme Pathologie - Rapport Scientifique année 1996 Auteur(s) : Renault, Tristan Berthe, Franck Chollet, Bruno Cochennec, Nathalie Haffner, Philippe Le Deuff, Rose-marie Lipart, Cecile Thebault, Anne Résumé : Le but de ce programme pathologie est de rechercher et d'étudier les agents pathogènes connus et inconnus chez les mollusques bivalves marins, plus particulièrement chez l'huître creuse, Crassostrea gigas, afin d'identifier d'éventuels agents causant des mortalités, de proposer des mesures prophylactiques et de définir des conditions zootechniques permettant aux professionnels de limiter l'impact des maladies sur leur cheptel. La présence de maladies, chez les mollusques bivalves marins dont l'impact socio économique peut être catastrophique pour les productions conchylicoles, et l'accroissement des échanges de produits d'aquaculture entre les pays de la CEE et avec les pays tiers nécessitent le renforcement des recherches dans les domaines de la pathologie. En particulier, du fait du mono élevage de l'huître japonaise, Crassostrea gigas, en France, il est aujourd'hui indispensable d'effectuer des contrôles zoosanitaires réguliers chez cette espèce. Ces travaux ont d'autant plus d'importance qu'aujourd'hui, devant les pathologies rencontrées, les professionnels restent extrêmement démunis (traitements inapplicables ou inexistants). Dans ce cadre, la promptitude du diagnostic ainsi que l'acquisition de données épidémiologiques et biologiques concernant les agents pathogènes impliqués sont les meilleurs moyens d'éviter leur dissémination chez les mollusques bivalves marins. Les travaux entrepris dans ce cadre par le Laboratoire de Génétique, Aquaculture et Pathologie de La Tremblade, semblent d'autant plus indispensables qu'il n'existait pas jusqu'à ces dernières années de pathologies identifiées chez l'huître creuse, Crassostrea gigas, sur le littoral français. Cependant depuis 1991, sont apparus dans certaines écloseries françaises des épisodes de mortalité sur des larves de cette espèce. Il a été possible de détecter un virus apparenté à la famille des Herpesviridae par ses caractères morphologiques (NICOLAS et al., 1992) et de démontrer sa pathogénicité pour les larves (LE DEUFF et al., 1994). Par ailleurs, chaque année depuis 1993, un virus de même type, a été observé en association à de fortes mortalités sur certains lots de naissain de la même espèce, originaires d'écloseries et de captage naturel. Droits : 1996 Ifremer http://archimer.ifremer.fr/doc/00043/15452/12827.pdf http://archimer.ifremer.fr/doc/00043/15452/ | Partager |